中国协和医科大学博士研究生申请之HSL基因表达

中国协和医科大学博士论文中文摘要以激素敏感性脂肪酶为靶点的天然减肥药物的初步筛选目的：肥胖症是危害人类健康的全球性疾病。肥胖增加人类患其他疾病的危险性，包括高血压，血脂异常( 如高胆固醇，高甘油三酯) ，2型糖尿病，冠心病，中风，胆囊疾病，骨关节炎，睡眠呼吸暂停，子宫内膜癌，乳腺癌，结肠癌等肿瘤和心理疾患。白色脂肪组织中脂肪的合成和分解与肥胖症的发生、发展关系密切。增加脂肪分解有助于减少脂肪细胞中甘油三酯的储存。激素敏感性脂肪酶( H sL)是脂肪分解过程中的主要限速酶，在脂肪分解过程中起重要的作用。通过细胞转染技术，将含人脂肪组织H sL基因启动子的荧光素酶表达质粒稳定转染小鼠3T3一L1前脂肪细胞中，并以此为工具，从众多中药天然化合物中寻找对H sL启动子活性有影响的药物，再通过动物实验观察药物对高脂膳食昆明小鼠体重、糖脂代谢的干预作用，及对小鼠体内白色脂肪组织H sL基因表达的影响，探讨以H SL为减肥药物筛选靶点的可行性。方法：1．建立含人脂肪组织H sL基因启动子的荧光素酶表达质粒的稳定转染小鼠3T3-L1前脂肪细胞株：以人基因组D N A为模版，克隆人脂肪组织H sL基因启动子序列( 一697．十53bp) ，将该片断插入到含荧光素报告基因的质粒载体pG L3-B踮i c-L1J c中，得到含人H sL基因启动子序列( ．697-+53bp) 的荧光素酶表达质粒。然后用脂质体转染法，将该质粒转染到小鼠3T3-Ll 前脂肪细胞中，经筛选药物G eneti ci n( G 418) 筛选，获得表达荧光素酶的稳定转染单克隆小鼠3T3．L1前脂肪细胞株。2．50％乙醇中药提取液( l i nesem edi cal herbs，Ec瑚)对人HsL基因启动予活性的影响：含人H SL基因启动子序列的荧光素酶报告质粒，其荧2